Pues bien, una tinción de gram es una prueba de laboratorio que se utiliza para distinguir aquellas bacterias que llamamos gram-positivas de aquellas otras que llamaremos gram-negativas. En el caso de las primeras, las bacterias adquieren una tonalidad violeta y en el caso de las segundas un color rojizo. Ya sabemos para que se utiliza dicha tinción pero...¿porqué unas se tiñen de color violeta y otras de color rojizo? La respuesta la encontramos en su pared bacteriana. La mayoría de personas- iniciadas en biología - la primera vez que oyen hablar de dicha tinción imaginan que el motivo por el cual las bacterias se tiñen de un color u otro es el grosor de la pared de dicha bacteria pero no, el motivo por el cual se tiñen de un colo o de otro es por la composición de dicha pared. Las bacterias gram-positivas tienen una pared celular de peptidoglicano, formada por redes de mureína muy desarrollada, es esta composición la que hace que se fije el tinte- cristal violeta -sobre la pared de la bacteria. Por contra las bacterias gram-negativas no poseen la red de mureína tan desarrollada, esta característica, junto a la membrana lipídica que rodea la capa de peptidoglicano hace que no fije el tinte cristal violeta pero, que si fije otro compuesto llamado safranina básica que le dará el color rosado/rojizo característico.
Procedamos ahora a hacer una explicación de como se hace una tinción de gram en el laboratorio. La bacteria utilizada para dicha tinción es el Staphylococcus aureus.
Para realizar la tinción de gram necesitaremos: la bacteria (S. aureus), cristal violeta, safranina básica(1%), lugol (I2), alcohol-acetona 1:1, portaobjetos, mechero bunsen, asa de siembra, pipeta pasteur, aceite de inmersión y un microscopio.
Procedimiento:
Primeramente esterilizamos el asa de siembre calentándola al rojo vivo con tal de no contaminar la muestra, cojeemos las bacterias con el asa de siembre y las esparcimos sobre el portaobjetos de manera que no quede ningún cúmulo grande de estas.
Primeramente esterilizamos el asa de siembre calentándola al rojo vivo con tal de no contaminar la muestra, cojeemos las bacterias con el asa de siembre y las esparcimos sobre el portaobjetos de manera que no quede ningún cúmulo grande de estas.
Acto seguido debemos fijar la muestra al portaobjetos flameando la dos o tres veces, con mucho cuidado de no incinerar la muestra.
Una vez realizado el paso anterior, procedemos a- con la ayuda de la pipeta pasteur - vertir el cristal violeta sobre la muestra, esperamos 1 min. aprox. y enjuagamos con agua.
Después de haber enjuagado con agua debemos añadirle el lugol, eperamos otro minuto y enjuagamos con agua.
Ahora debemos de añadir el alcohol-acetona 1:1, esperamos solamente entre 4 y 10 segundos y enjuagamos con agua.
Cuando hayamos finalizado dicho paso, y siempre con la ayuda de una pipeta pasteur (no contaminada) para no desperdiciar reactivos, agregamos la safranina básica al 1%, esperamos otro minuto y enjuagamos.
Es el momento de observar el resultado. Colocamos una gota de aceita de inmersión sobre nuestra muestra, cuando esta ya esté seca, y ajustamos el microscopio a 100X que multiplicado por los 10X del ocular nos da un resultado de 1000X. El objetivo ha de estar en contacto con el aceite de inmersión.
Como podemos observar, las bacterias muestran un color violeta.
Resultado: Gram-positivo
Practica realizada en el laboratorio con motivo de elaborar el "treball de recerca" exigido a los alumnos de 2º de Bachillerato cursado en Cataluña.
No hay comentarios:
Publicar un comentario